皮膚細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可模擬人體內(nèi)的生理環(huán)境，研究細(xì)胞與細(xì)胞之間的反應(yīng)，細(xì)胞與間質(zhì)之間的反應(yīng)等，具有快速、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，既可用來(lái)毒性分析，也可進(jìn)行功效評(píng)價(jià)，是保證化妝品安全、有效的必要手段，為皮膚生理學(xué)等提供了技術(shù)基礎(chǔ)。

一、人永生化角質(zhì)細(xì)胞（Human immortalized keratinocytes，HaCaT 細(xì)胞）

角質(zhì)形成細(xì)胞（KC）的體外培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)十分成熟，其生長(zhǎng)較快、細(xì)胞存活率較高，但也易老化且傳代次數(shù)較少，所以在化妝品功效評(píng)價(jià)中通常會(huì)使用HaCaT細(xì)胞（即非腫瘤來(lái)源的永生化人正常皮膚的KC株，與KC分化特性相似，具有易于培養(yǎng)、傳代次數(shù)多的優(yōu)點(diǎn)）。

1、HaCaT細(xì)胞應(yīng)用于保濕功效評(píng)價(jià)

HaCaT細(xì)胞可合成透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）、水通道蛋白（Aquaporin，AQP）、緊密連接蛋白（Tightjunction protein，TJP）以及絲聚蛋白（Filaggrin，F(xiàn)LG）等與皮膚保濕相關(guān)的生物分子。因此，可以通過(guò)檢測(cè)化妝品原料對(duì)HaCaT細(xì)胞中AQP、claudin-1（claudin-1是TJP中形成表皮細(xì)胞旁屏障的主要跨膜蛋白）和FLG等保濕相關(guān)蛋白含量的影響來(lái)反映其保濕能力，對(duì)保濕化妝品進(jìn)行功效評(píng)價(jià)。

不過(guò)現(xiàn)在進(jìn)行保濕功效檢測(cè)一般會(huì)通過(guò)人體試驗(yàn)的方法，這樣更直觀一些，HaCaT細(xì)胞檢測(cè)可用于研究原料的保濕機(jī)理。

2、HaCaT細(xì)胞應(yīng)用于抗氧化功效評(píng)價(jià)

活性氧（ROS）過(guò)量會(huì)對(duì)DNA和蛋白質(zhì)產(chǎn)生氧化損傷；丙二醛（MDA）是生物體內(nèi)自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物。因此，通過(guò)檢測(cè)其中HaCaT細(xì)胞內(nèi)ROS和MDA的含量變化可反映出細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的水平， 評(píng)價(jià)化妝品原料的抗氧化能力。

超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPX）可用于用于清除或降低氧自由基造成的損傷。因此，通過(guò)檢測(cè)SOD、CAT和GSHPX的活力，可反映化妝品原料對(duì)HaCaT細(xì)胞內(nèi)自由基的清除能力的影響，以此來(lái)評(píng)價(jià)化妝品原料的抗氧化能力。

例如，王茵等人通過(guò)測(cè)量小鼠肝臟組織的抗氧化酶系統(tǒng)活性（SOD，GSHPX，AOC（總抗氧化能力），MDA，NO（一氧化氮））來(lái)研究蝦青素的抗氧化效果。終結(jié)果顯示蝦青素可提高小鼠肝臟和血液中的SOD，GSHPX，AOC等活性指標(biāo)，降低MDA和NO的濃度，即蝦青素具有抗氧化能力。

二、小鼠B-16黑色素瘤細(xì)胞（簡(jiǎn)稱B-16細(xì)胞）

黑素細(xì)胞（Melanocyte，MC）是皮膚內(nèi)的一種特殊細(xì)胞，它位于表皮的基底層，細(xì)胞內(nèi)的黑素小體（Melanosomes）能合成黑色素（Melanin），并轉(zhuǎn)移到周圍的角質(zhì)形成細(xì)胞中，為皮膚提供顏色。但是黑素細(xì)胞的增殖比較緩慢，所以常用B-16細(xì)胞代替黑素細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。（B-16細(xì)胞在基本結(jié)構(gòu)與黑色素合成功能方面與人黑素細(xì)胞基本相同，且增殖能力更強(qiáng)，能夠多次傳代，適合用于實(shí)驗(yàn)研究）。

B-16細(xì)胞可應(yīng)用于美白功效評(píng)價(jià)，例如馬佳等研究了壬二酸對(duì)人表皮黑素細(xì)胞和鼠黑素瘤B16細(xì)胞黑素合成的影響。與空白對(duì)照組比較 0.1 mmol//L壬二酸即顯示抑制人表皮黑素細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素的合成，同等濃度的壬二酸對(duì)鼠黑素瘤B16細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素合成也有抑制作用。

三、人皮膚成纖維細(xì)胞（Human skin fibroblast，HSF）

HSF是皮膚真皮層中主要的細(xì)胞，對(duì)于維持皮膚的彈性和張力具有重要的作用。HSF具有很強(qiáng)的蛋白質(zhì)合成能力，可以合成并分泌大量彈性蛋白、膠原蛋白、糖胺多糖和糖蛋白等基質(zhì)成分，進(jìn)而生成彈性纖維、膠原纖維和網(wǎng)狀纖維，分泌多種細(xì)胞修復(fù)因子，使得皮膚具有強(qiáng)大的更新與自我修復(fù)能力。

人皮膚成纖維細(xì)胞可應(yīng)用于抗衰老功效評(píng)價(jià)，例如鄭雯等研究了白藜蘆醇對(duì)UVB照射的人皮膚成纖維細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-1）水平及細(xì)胞凋亡的影響，即白藜蘆醇對(duì)紫外線照射皮膚的光保護(hù)作用。結(jié)果表明白藜蘆醇能通過(guò)抑制UVB照射所造成的人皮膚成纖維細(xì)胞MMP-1水平增長(zhǎng)，使皮膚真皮組織膠原蛋白的分解減少，從而延緩紫外線照射對(duì)皮膚造成的損傷和老化進(jìn)程。

四、人角質(zhì)形成細(xì)胞（HKC）

人角質(zhì)形成細(xì)胞系一種能合成角質(zhì)蛋白的上皮細(xì)胞。此類細(xì)胞為表皮的主體，由表皮深層始逐漸增殖、分化，并不斷向表層移行，其間可分成幾個(gè)層次，表皮深層為基底層，向上依次為棘層、顆粒層、角質(zhì)層，角質(zhì)蛋白亦依生長(zhǎng)層次逐漸合成。

人角質(zhì)形成細(xì)胞是表皮中重要的細(xì)胞之一，它可以反映表皮的健康狀態(tài)，所以也有大量的研究人員將它應(yīng)用于化妝品原料的研究與應(yīng)用，例如王剛等通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)阿魏酸是通過(guò)影響HKC下游炎癥因子如TNF-α和IL-8分泌，從而參與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制，達(dá)到對(duì)HKC的保護(hù)作用。

檢測(cè)流程

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